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篇1：利用IRS-PCR技术分析金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌基因多态性
利用IRS-PCR技术分析金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌基因多态性
目的:利用IRS-PCR技术分析院内感染金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌基因组多态性,以期进行更加行之有效的院内感染监控.方法:收集重症监护病房中引起院内感染的.金黄色葡萄球菌23株和铜绿假单胞菌10株;利用IRS-PCR方法进行基因组多态性分析.结果:金黄色葡萄球菌表现明显同源性,与质控菌株显著不同;同病房不同来源铜绿假单胞菌则呈现不同型别多态性特征.结论:重症监护病房短期内存在金黄色葡萄球菌暴发流行;利用IRS-PCR技术进行细菌多态性分析快速、准确、可靠,而且可用于不同菌种,是用于流行病学监测的有效方法.
作 者：叶杨芹 应春妹 杨海慧 汪雅萍 张灏F 于嘉屏 Ye Yang-qin Ying Chun-mei Yang Hai-hui Wang Ya-ping Zhang Hao-min Yu Jia-ping 作者单位：上海交通大学医学院附属仁济医院检验科,上海,27 刊 名：中国卫生检验杂志 ISTIC英文刊名：CHINESE JOURNAL OF HEALTH LABORATORY TECHNOLOGY 年，卷(期)： 17(7) 分类号：Q7 关键词：IRS-PCR 基因多态性篇2：分析铜绿假单胞菌的耐药
分析铜绿假单胞菌的耐药
摘 要：目的：了解铜绿假单胞菌(PA)医院感染现状及其对抗菌药物的耐药性，为临床医生合理用药提供科学依据。方法：1月-6月某三甲医院分离的1003株铜绿假单胞菌株进行耐药分析，采用法国生物梅里埃VITEK-2 XL全自动微生物鉴定系统，及VITEK-2配套药敏卡片。结果：PA在呼吸道标本中检出率最高，占74.88%，在20种抗菌药物中耐药率小于30%从低到高依次为阿米卡星(2.4%)、妥布霉素(3.9%)、哌拉西林/他唑巴坦(5.9%)、庆大霉素(6.2%)、左旋氧氟沙星和环丙沙星(6.7%)、美洛培南(7.8%)、亚胺培南(7.9%)、头孢吡肟(8.7%)、哌拉西林(9.8%)、头孢他啶(11.7%)、氨曲南(21.2%)。-与-20的PA耐药率比较，差异均有统计学意义(P<0.001)。结论：PA是医院感染重要致病菌，加强监控了解耐药机制及规范用药以减少高耐菌的产生。
关键词：绿假单胞菌; 医院感染： 耐药机制
1 资料与方法
1.1 一般资料
1003株菌株来源于201月-年7月笔者所在医院送检标本。送检标本阳性分离率前五位依次为痰液(包括咽拭子，支气管灌洗液)、分泌物、体液、血、尿。
1.2 方法
采用法国生物梅里埃VITEK-2 XL全自动微生物鉴定系统，及VITEK-2配套药敏卡片。
1.3 质控操作
按全国检验操作规程及仪器操作说明书，美国CLSI药敏规则。质控菌株ACTT27853。
1.4 统计学处理
采用SPSS 18.0软件对所得数据进行统计分析，计量资料用均数±标准差(x±s)表示，比较采用t检验;计数资料以率(%)表示，比较采用字2检验。P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 耐药监测情况
分离率前5名的标本来源：痰751株(74.9%)，分泌物89株(8.9%)，体液83株(8.31%)，血36株(3.6%)，尿33株(3.3%)。在20种抗菌药物中耐药率小于30%从低到高依次为阿米卡星(2.4%)，妥布霉素(3.9%)，哌拉西林/他唑巴坦(5.9%)，庆大霉素(6.2%)，左旋氧氟沙星和环丙沙星(6.7%)，美洛培南(7.8%)，亚胺培南(7.9%)，头孢吡肟8.7%，哌拉西林(9.8%)，头孢他啶(11.7%)，氨曲南(21.2%)。PA菌的感染主要在呼吸道。详见表1。
2.2 2004-20与2012-2013年的PA耐药率比较
笔者回顾2004-2007年同家医院的PA感染和耐药性检测，对几种PA常见的抗菌药物比较，差异均有统计学意义(P<0.001)。详见表2。
3 讨论
PA菌感染多继发于不同免疫损伤的基础疾病上，病情复杂，由于抗菌药物在不同的组织内浓度不尽相似，其临床治疗效果决定于感染程度及其部位;PA菌在临床感染中的来源非常广，从机体的深部以至表皮均见其踪影，而以呼吸道的感染最常见，在血流、胸腹腔等体液等危险部位也占一定的比例。本资料显示，PA菌的标本来源以呼吸道为主，其次为分泌物、体液、血液、尿液，其呼吸道感染仍是PA的主要感染方式;常见感染诱因：PA在自然界较为广泛分布，在于人类的皮肤和肠道亦存在，是人体的正常菌群之一。
由于此菌在环境中的广泛存在，因此很容易污染医疗器械而造成感染机会，特别是气管插管或器官切开等，使上呼吸道的过滤功能失去作用;气管纤毛活动减退或消失，削弱了肺免受感染的保护机制，加上机械通气、人工吸痰等操作，使感染的机会大大增加，对于这类高危患者，临床应重视及时对痰标本的收集送检;铜绿假单胞菌败血症也是临床上常见的感染之一，多继发于大面积烧伤、白血病、淋巴瘤、恶性肿瘤、静脉导管、心瓣膜置换术及各种严重慢性疾病等的过程中，本菌引起的败血症约占革兰阴性杆菌败血症7%～18%，居第3或第4位，但其死亡率则是革兰阴性杆菌败血症的首位，应给予高度重视并及时正确的处置。假单胞菌的尿路感染是医院内泌尿道交叉感染的常见菌之一，留置导尿管是截瘫患者获得感染的最常见诱因，其他如神经原膀胱、尿路梗阻，慢性尿路感染长期应用抗菌治疗亦易罹患假单胞菌感染，有资料报道40%的铜绿假单胞菌败血症的原发病为尿路感染。
铜绿假单胞菌的主要耐药机制：耐药机制异常复杂，总括之，主要与以下因素有关：
(1)细菌产生抗菌活性酶，如β-内酰胺酶、氨基糖苷钝化酶等;
(2)细菌改变抗菌药物作用的靶位，如青霉素结合蛋白(PBPs)、DNA旋转酶等结构发生改变，从而逃避抗菌药物的抗菌作用;
(3)外膜通透性降低;
(4)生物膜形成;
(5)主动泵出系统。
其中主动泵出系统在铜绿假单胞菌多重耐药机制中起着主导作用;抗菌药物的主要作用机理及耐药机制：三四代头孢的耐药与PA菌外膜通透性降低，产β-内酰胺酶，产低亲和力的PBPs有关，氟喹诺酮药[1]，对抗生物膜效果很强，是临床治疗PA的主要药物之一。环丙沙星是氟喹诺酮问世以来，第一个被应用于治疗PA感染的药物，左氧氟沙星是氧氟沙星的左旋异构体，通过阻断细菌DNA合成而达到抑菌的效果。但随着氟喹诺酮类的广泛应用其耐药率也不断增高。有研究表明：喹诺酮类药物的耐药机制主要包括以下几个方面，QRDR基因突变：导致酶结构改变，使药物不能与酶DNA复合物稳定结合;gyrA基因的突变是氟喹诺酮类药物对PA临床分离株的主要耐药机制，parC基因的突变可使耐药性增强;主动外排泵系统的`变异而导致细胞内药物浓度降低;外膜蛋白和脂多糖的变异均能使细菌摄取药物的量减少而导致耐药[2]。
氨基糖苷类药物的耐药机制与氨基糖苷类纯化酶的产生和多重耐药主动外排系统有关，临床常用联合用药方式治疗PA感染，如碳青霉烯类抗生素与氨基糖苷类抗生素或与新一代氟喹诺酮类抗生素合用，可降低MDRP耐药率;加酶抑制剂的β-内酰胺酶类复合抗菌药物[3]在治疗产ESBL的铜绿假单胞菌有较好的效果，碳青酶烯类对β-内酰胺酶的PA抗菌活性很强，耐药率低，但其同时也是一种很强的β-内酰胺酶的诱导剂，其耐药机制与PA产金属酶及细菌的特异性外膜通道蛋白OPrD2丢失有关，耐碳青酶烯类的PA常为多重耐药菌，甚至为泛耐菌，故临床应合理地慎用亚胺培南和美洛培南;耐药监测：本文资料在20种抗生素中，氨苄西林、呋喃妥因、头孢唑林、头孢呋辛钠、头孢呋辛酯、呋喃妥因、复方新诺明的耐药率极高均大于92%，三代头孢中的头孢曲松耐药率也高达84.3%，氨曲南耐药率21.2%，按耐药率低于30%的推荐用药原则，其余抗菌药物可做为推荐用药。
在同家医院不同时期PA对9种抗菌药物的耐药率监测对比资料显示，该院在科学合理用药方面不断地规范和取得明显成效;实验室快速准确的病原菌分离和耐药性监测，有利于指导临床抗生素的正确使用，减少院内感染，节约医疗资源，了解各类抗菌药物作用机制及细菌的耐药机制，有利于防止多重耐药菌和泛耐菌的蔓延和扩散。
参考文献
[1]谢景超.铜绿假单胞菌感染的抗菌药物选择[J].中南药学，，3(2)：119.
[2]王燕.铜绿假单胞菌的耐药机制及抗生素应用[J].实用医技杂志，，15(11)：1408-1409.
[3]黄艺云，胡慧文.下呼吸道489株铜绿假单胞菌的耐药分析[J].实验与检验医学，2008，11(6)：714..
篇3：110株铜绿假单胞菌的分离及耐药情况
110株铜绿假单胞菌的分离及耐药情况
铜绿假单胞菌是医院内感染的主要病原菌之一,而且由于抗菌药物广泛、不合理使用及多重耐药菌株的出现,使其耐药性问题日趋严重.现将我院2005-年分离的'110株铜绿假单胞菌的临床分布特征及药敏结果分析报告如下.
作 者：王国英 作者单位：河北东光县医院检验科,河北沧州,061600 刊 名：解放军预防医学杂志 ISTIC PKU英文刊名：JOURNAL OF PREVENTIVE MEDICINE OF CHINESE PEOPLE'S LIBERATION ARMY 年，卷(期)： 27(1) 分类号：Q939.11 R969.3 关键词：铜绿假单胞菌 抗生素 耐药性篇4：分析黏液型铜绿假单胞菌对抗生素的耐药性
分析黏液型铜绿假单胞菌对抗生素的耐药性
摘 要：目的 探讨黏液型铜绿假单胞菌(PA)的耐药性和耐药特征，指导临床合理使用抗菌药物。 方法采用湖南天地人微生物分析系统对辽阳市二院1月～12月临床分离的95株黏液型铜绿假单胞菌耐药情况进行数据分析。 结果 黏液型铜绿假单胞菌对美洛培南100.0%敏感，其余抗菌药物的耐药率为2.1%～35.8%;20～20黏液型铜绿假单胞菌对除美洛培南以外的其他抗生素耐药性有上升趋势。 结论 黏液型铜绿假单胞菌对抗生素体外药敏试验耐药性较低，但由于产生生物膜，体内呈耐药现象。临床治疗选药时必须考虑黏液型铜绿假单胞菌在体内存在生物膜的影响因素，应加强监测，指导临床合理使用抗生素并控制医院耐药菌感染的流行。
关键词：黏液型铜绿假单胞菌;耐药性;生物膜;抗菌药物
铜绿假单胞菌广泛分布于各种水、空气，及正常人的皮肤、肠道和呼吸道等处，是土壤中最常见细菌之一，也是临床上常见的条件致病菌，可引起人体多部位感染。因其易定植、易变异以及多重耐药性的特征，已成为医院感染的重要病原菌之一。全国革兰阴性菌耐药监测(NPRS)数据显示，近年来铜绿假单胞菌在所有院内感染的革兰阴性菌中位居前列[1]。本文对本院分离出的95株黏液型铜绿假单胞菌进行耐药性分析，以指导临床合理使用抗生素。
1 资料与方法
1.1 一般资料
菌株来源于2009年1月～年12月辽阳市第二人民医院临床分离的95株黏液型铜绿假单胞菌(排除同一患者相同部位重复分离到的相同细菌)，以铜绿假单胞菌ATCC27853为药敏实验质控菌株(购自中国药品生物制品检定所)。
1.2 仪器与试剂
哥伦比亚血琼脂培养基(贝瑞特生物技术(郑州)有限公司生产，批号：0011219)，伊红美兰培养基(自制)，伊红美兰琼脂(杭州天和微生物试剂有限公司生产，生产批号：120531)，湖南天地人微生物分析系统TRB-200B(湖南长沙天地人生物科技有限公司生产)，湖南天地人非发酵菌科生化药敏试验卡(湖南天地人生物科技有限公司生产，批号：2012829)。
1.3 方法
严格按照《全国临床检验操作规程》将送检标本接种在血培养基和伊红亚甲蓝培养基，取血培养基上生长良好的可疑菌落进行分离培养，取纯培养菌落配制0.5麦氏单位细菌悬液，用湖南天地人微生物分析系统非发酵菌科细菌药敏鉴定板进行鉴定，经鉴定为铜绿假单胞菌，药敏结果均通过专家分析系统。抗生素的耐药率的计算方法：抗生素的耐药率 =(抗生素中介的菌株数 + 抗生素耐药的菌株数)/抗生素药敏实验菌株数×100%。
2 结果
药敏结果提示，2009～2012年16种抗生素对铜绿假单胞菌的总耐药率分别为：哌拉西林35.8%、氨曲南32.6%、头孢唑啉28.4%、头孢曲松27.4%、庆大霉素26.3%、妥布霉素17.9%、复方新诺明15.8%、哌拉西林/他唑巴坦11.6%、黏菌素10.5%、环丙沙星8.4%、氧氟沙星7.4%、左氧氟沙星6.3%、头孢他啶5.3%、头孢吡肟4.2%、阿米卡星2.1%、美洛培南0.0%;2009～2012年每年分离的黏液型铜绿假单胞菌分别为：16、23、26、30株，呈逐年上升趋势;95株黏液型铜绿假单胞菌的药敏结果提示，黏液型铜绿假单胞菌对美洛培南100.0%敏感，其余抗菌药物的耐药率为2.1%～35.8%;2009～2012年黏液型铜绿假单胞菌对16种抗生素的耐药率结果提示，黏液型铜绿假单胞菌对除美洛培南以外的其他抗生素的耐药性有上升趋势(表1)。
3 讨论
铜绿假单胞菌在自然界中广泛存在，能引起人体多脏器、多部位的严重感染，是临床常见的条件致病菌[2]，主要导致呼吸道、泌尿道和血液感染[3]。本文结果提示，黏液型铜绿假单胞菌对美洛培南敏感，其余抗菌药物的耐药率为：阿米卡星 < 头孢吡肟 < 头孢他啶 < 左氧氟沙星 < 氧氟沙星 < 环丙沙星 < 黏菌素 < 哌拉西林/他唑巴坦 < 复方新诺明 < 妥布霉素 < 庆大霉素 < 头孢曲松 < 头孢唑啉 < 氨曲南 < 哌拉西林。2009～2012年黏液型铜绿假单胞菌对除美洛培南以外的其他抗生素耐药性有逐年上升的趋势。黏液型铜绿假单胞菌虽然体外药敏试验敏感，但临床体内用药大多无效，主要是因为其细菌表面产生大量黏液，而形成生物膜[4]。铜绿假单胞菌是常见的形成生物膜的菌类之一，形成生物膜后，由于其渗透限制作用，导致细菌耐药性增强，难以清除[5]。临床用奎诺酮类药物与敏感的`其他抗菌素联合用药，奎诺酮类药物能破坏黏液型铜绿假单胞菌的生物膜[6]，使抗生素进入到菌体内部，从而达到杀灭致病菌的效果。近年来，泛耐药铜绿假单胞菌的产生使临床对铜绿假单胞菌的治疗面临新的问题[7]，本文临床分离的95株黏液型铜绿假单胞菌中未发现泛耐药菌株。铜绿假单胞菌对抗菌药物的高耐药性仍是我国临床医学面临的严峻问题[8]，黏液型铜绿假单胞菌被膜的产生有多方面的原因，大量抗菌药物的应用及内置管道等都易诱发生物膜的产生，临床应加强加大抗菌药物的监管和应用，减少黏液型铜绿假单胞菌引起的院内感染，监测抗菌药物对黏液型铜绿假单胞菌的耐药性变化，及时为临床提供抗菌药物的耐药性变化，指导临床用药。
参考文献：
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[4] 蓝锴，张伟铮，罗强，等. 不同方法检测你黏液型铜绿假单胞菌药物敏感性结果准确性探讨[J]. 检验医学，2012，27(7)：544-548.
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[7] 郑荣，曹伟，李彩霞. 体外联合用药对多重耐药铜绿假单胞菌抗菌活性的研究[J]. 中国现代医学杂志，2008，18(3)：813-815.
[8] 张颖，陈惠玲，赵子文，等. 鲍曼不动杆菌和铜绿假单胞菌在医院感染中的地位及耐药分析[J]. 临床和实验医学杂志，2011，10(13)：1010-1012.
篇5：铜绿假单胞菌整合子与多重耐药性研究
【摘要】目的 在铜绿假单胞菌中检测1类整合子并分析整合子对细菌耐药性的影响。 方法 用VITEK-AMS 微生物自动分析仪鉴定细菌和药敏试验，用PCR方法扩增I类整合酶基因，经电泳后检测扩增产物。 结果 158株铜绿假单胞菌中检测出1类整合子42株，检出率为26.6%。1类整合子阳性菌对氨基糖苷类、喹诺酮类及头孢菌素类药物表现出较高的耐药率。携带1类整合子菌株易表现出对至少4种抗菌素的多重耐药性，其多重耐药率为68.6%(33/48)，明显高于1类整合子阴性菌株(28.6%)，P<0.05。 结论 1类整合子广泛存在铜绿假单胞菌中,1类整合子对细菌多重耐药性的产生和传播起着重要作用，应加强临床细菌基因水平的耐药监测，采取有效措施防止耐药性的传播。
篇6：铜绿假单胞菌整合子与多重耐药性研究
铜绿假单胞菌为条件致病菌，是医院内感染的主要病原菌之一。患代谢性疾病、血液病和恶性肿瘤的患者以及术后或某些治疗后的患者易感染本菌。本菌引起的感染病灶可导致血行散播，而发生菌血症和败血症。烧伤后感染了铜绿色假单胞菌可造成死亡。随着抗生素的广泛使用和不合理使用，使包括铜绿假单胞菌在内的多种细菌的耐药性问题日益严重。
整合子是与细菌耐药性传播有关的基因系统，整合子通过捕捉和整合细菌耐药基因，在细菌耐药性的传播和扩散中起了重要的作用。整合子通过位点特异性的基因重组可整合多种耐药基因对细菌多重耐药的形成起着重要作用职称论文。
本文对158株铜绿假单胞菌进行分析，以探讨铜绿假单胞菌整合子与其多重耐药性之间的关系。
1 材料和方法
1.1 材料
1.1.1 菌株来源
10月～5月从我院临床标本中分离的铜绿假单胞菌158株。标本分别来自老年病房(53株)、呼吸科病房(49株)、普外科病房(28株)、泌尿科病房(16株)和内分泌病房(12株)。菌株分别分离自痰标本(68株)、脓汁(42株)、咽拭子(18株)、尿标本(12株)、伤口分泌物(10株)和血液(8株)。标准质控菌株为铜绿假单胞菌(ATCC27853)。携带1型整合子铜绿假单胞菌为本实验室分离株经测序证实，作为PCR实验阳性对照。
1.1.2 鉴定卡片
全自动微生物分析仪(VITEK-AMS)采用的GNI鉴定卡、GNS药敏卡均购自法国Biomerievx公司,GNS药敏卡包括氨苄青霉素、庆大霉素、环丙沙星、阿莫西林/克拉维酸、头孢他啶、哌拉西林、哌拉西林/他唑巴坦、丁胺卡那、复方新诺明、头孢噻肟、亚胺培南11种抗菌药物职称论文。
1.1.3 PCR试剂
TaqDNA聚合酶,4种dNTP混合液,DNA分子标准参照物购自Takara公司;琼脂糖,溴化乙啶等常用分子生物学试剂购自上海生工公司。
1.1.4 主要仪器
VITEK-AMS自动鉴定系统购自法国Biomerievx公司;PCR扩增仪、DNA/RNA/protein analyzer分析仪和高速低温离心机购自德国eppendorf公司;PCR电泳仪为北京崇文东方仪器厂产品;DGW-99型台式高速微型离心机为宁波新芝科器研究所产品。
1.2实验方法
1.2.1 菌株鉴定
所有菌株都用VITEK AMS 分析仪GNI细菌鉴定卡进行菌种鉴定。体外药物敏感试验：采用GNS检测卡测定13种抗菌药物对158株铜绿假单胞菌的MIC值，操作方法按照VITEK AMS规定的方法进行。
1.2.2加热裂解法制备DNA模板
:用Luria-Bertani液体培养基200r/min振荡培养8h获得对数生长期菌株。携带1型整合子铜绿假单胞菌为本实验室分离株经测序证实，作为PCR实验阳性对照。
1.2.3筛选1型整合子阳性菌株
用PCR方法扩增整合子可变区，以整合子上游引物ggcatccaagcagcaagc和整合子可变区下游引物aagcagacttgacctgat，进行PCR扩增。50ulPCR反应体系为:DNA100ng、25mmol/LMgCl2、0.4mmol/LdNTP、0.4pmol/L引物和2.5UTaq酶。PCR反应循环参数设置如下94℃预变性4分钟;94℃45秒，55℃，45秒，72℃3分钟，循环35次;最后72℃延伸10分钟。
1.2.4 PCR反应结束后取产物琼脂糖凝胶电泳检测，在紫外灯下拍照记录结果。
1.2.5 统计学处理
采用χ2检验，P<0.05有显著差异。统计软件为SPSS10.0。
2 结果
2.1 1类整合子基因检测结果
全部158株铜绿假单胞菌的`DNA上有42株检测到I类整合子，占细菌总数的26.6%。1类整合子的大小分别为600bp、1000bp、1600bp、1900bp和2100bp。根据各株细菌质粒DNA上检测到1类整合子的大小和数目，细菌质粒NDA上的整合子可分为5种整合子谱。
2.2 1类整合子阳性菌株与耐药性的关系
对比1类整合子阳性菌株与阴性菌株对抗菌药物的耐药率，并做统计分析，结果见表1。
1类整合子阴性菌株对11种抗菌药物完全敏感率为54.4%(86/158)。1类整合子阳性菌株更易表现出对青霉素、喹诺酮类、磺胺类药物的耐药。耐药率最高的是复方新诺明(100%)其次为氨苄青霉素(90.5%)和庆大霉素(85.7%)，丁胺卡那也表现出较高的耐药率(76.7%)。1类整合子阳性菌株对6种药物的耐药率显著高于阴性菌株，P<0.05。
2.3 1类整合子与多重耐药率的相关性
多重耐药率(耐4种以上抗生素)为62.0%(98/158)，其中1类整合子阳性菌株多重耐药率占85.7%(36/42)，阴性菌株多重耐药率为20.7%(24/116)。1类整合子阳性菌株多重耐药率明显高于阴性株，差异有统计学意义(χ2=18.23，P<0.01)。
3 讨论
整合子是存在于细菌质粒、染色体或转座子上的一种遗传结构，可以捕获耐药基因，使细菌表现为对抗生素的多重耐药[1]给临床治疗带来极大的困难。整合子本身不能移动，但常作为转座子的一部分或借助可移动性质粒在同种细菌或不同种细菌间播散，造成细菌耐药性的扩大，是细菌多重耐药迅速发展的重要原因。根据整合酶的不同分为6 类[2]在临床分离的菌株中以 1类合子最为常见。1类整合子基本结构由三部分组成,两端为高度保守的序列，分别称作5’CS和3’CS,5’CS和3’CS之间为可变区，可变区由一个或多个外来插入的基因盒组成[3]。在整合酶的催化下.通过位点重组系统整合外来耐药基因，使耐药基因得到不断的累积，从而使细菌具有耐药性和多重耐药性。目前在1类整合子中发现的基因盒已超过80种，大部分是耐药基因盒，编码产物可赋予细菌对几乎全部临床抗生素耐药。
篇7：铜绿假单胞菌和鲍曼不动杆菌的临床分布和耐药性分析
[摘要]目的 调查分析医院～铜绿假单胞菌和鲍曼不动杆菌的临床分布及耐药性，为临床合理使用抗菌药物和及早预防和控制医院感染提供科学依据。 方法 回顾性统计1月～2012月嘉兴地区两所综合性三甲医院中分离的铜绿假单胞菌和鲍曼不动杆菌的临床资料，进行耐药性分析。 结果 铜绿假单胞菌和鲍曼不动杆菌分离率以痰液最高，分别占68.35%和81.79%;科室分布铜绿假单胞菌以呼吸内科为主(17.65%)，鲍曼不动杆菌以ICU为主(19.03%);铜绿假单胞菌对亚胺培南和美洛培南的耐药率呈逐年上升趋势，分别从8.45%、8.09%上升到13.10%、11.16%;鲍曼不动杆菌对头孢吡肟、亚胺培南、美洛培南、头孢哌酮/舒巴坦、左氧氟沙星等抗菌药物耐药率为19.36%～32.80%，对氨曲南、头孢曲松的耐药率达90%。 结论 铜绿假单胞菌和鲍曼不动杆菌是医院最常见的条件致病菌，临床应加强耐药性监测，减少多重耐药菌的产生，避免院内感染和暴发流行。
篇8：铜绿假单胞菌和鲍曼不动杆菌的临床分布和耐药性分析
铜绿假单胞菌和鲍曼不动杆菌属于非发酵革兰阴性菌，是目前医院感染的主要条件致病菌，也是非发酵菌属中分离率最高的两种细菌。近年来随着临床抗菌药物的广泛使用以及各种侵入性操作的增多，使铜绿假单胞菌和鲍曼不动杆菌的多药耐药和泛耐药菌株不断增加，给医院感染控制和临床抗感染治疗带来极大困难。为更好地指导临床合理使用抗菌药物，笔者对2012～年嘉兴地区两所综合性三甲医院铜绿假单胞菌和鲍曼不动杆菌的.临床分布及耐药性进行回顾性调查与分析，现报道如下：
1 资料与方法
1.1 菌株来源
来自201月1日～2013年12月31日嘉兴地区两所综合性三甲医院各类临床送检标本，包括痰液、分泌物、尿液、胆汁、胸腹水、血液、导管、脑脊液等。
1.2 病原菌鉴定与药敏试验
病原菌鉴定与药敏采用法国梅里埃公司VETIK-2 Compact全自动细菌鉴定仪，及其配套GP、GN、GP-67、GN-16、GN-13鉴定和药敏卡。分离与鉴定参照《全国临床检验操作规程》进行。药物敏感试验结果判读参照美国临床实验室标准化委员会(CLSI)每年更新内容进行判读。
1.3 质控菌株
大肠埃希菌ATCC25922、铜绿假单胞菌ATCC-27853、金黄色葡萄球菌 ATCC29213、粪肠球菌ATCC 29212和肺炎克雷伯菌ATCC70063，购自原卫生部临床检验中心。
1.4 数据分析
采用WHO细菌耐药性监测推荐的Whonet 5.6软件进行耐药性分析，剔除重复菌株。
2 结果
2.1 病原菌的标本分布
2012年1月～2013年12月两家医院各类标本共检出1858株铜绿假单胞菌、1829株鲍曼不动杆菌，铜绿假单胞菌和鲍曼不动杆菌均以痰液分离率最高，分别占68.35%和81.79%;其次为分泌物，占16.95%和8.26%;尿液，占5.17%和 3.66%。见表1。
篇9：铜绿假单胞菌和鲍曼不动杆菌的临床分布和耐药性分析
2.3 铜绿假单胞菌的耐药率
铜绿假单胞菌对阿米卡星和妥布霉素耐药率最低，仅为1.15%～3.02%，对头孢吡肟、哌拉西林/他唑巴坦、庆大霉素、亚胺培南、美洛培南、阿米卡星、妥布霉素耐药率小于10%，对亚胺培南和美洛培南的耐药率呈上升趋势，分别从2012年的8.45%、8.09%上升到2013年的13.10%、11.16%;而对阿莫西林/克拉维酸和氨苄西林/舒巴坦的耐药率高(>90%)。见表3。
2.4 鲍曼不动杆菌的耐药率
鲍曼不动杆菌对妥布霉素、阿米卡星耐药率较低，为6.18%～14.6%，对替加环素的耐药性增长迅速，从2012年的2.20%上升到2013年的24.00%;对头孢吡肟、亚胺培南、美洛培南、头孢哌酮/舒巴坦、哌拉西林/他唑巴坦、环丙沙星、左氧氟沙星、复方新诺明、四环素和庆大霉素具有一定的耐药性，耐药率为19.36%～32.80%，而对氨曲南、头孢曲松的耐药率高(>90%)。见表4。
3 讨论
3.1 铜绿假单胞菌感染的临床分布及耐药性
铜绿假单胞菌是一种需氧革兰阴性杆菌，对周围生存繁殖环境和营养要求不高，在医院内潮湿环境和人体肠道可定植，引起抵抗力受损患者发生院内感染，可导致人体局部器官及全身性、多发性医院感染[1]。近年来由于广谱抗菌药物、激素及免疫抑制剂的广泛应用，各种侵入性诊断与治疗操作的不断普及，铜绿假单胞菌已成为医院感染的重要病原菌之一，给临床抗感染治疗带来了极大困难[2]，在免疫力低下的医院获得性肺炎患者中尤其多见[3]。患者感染了铜绿假单胞菌，尤其是多重耐药或者广泛耐药菌株后，由于对抗菌药物的敏感性差，治疗困难，病情常常迁延不愈，严重时可导致铜绿假单胞菌脓毒症，具有重症性、难治性、持续反复性等特点，已经引起国内外专业人士的关注。
本研究结果显示，铜绿假单胞菌最常见分离自呼吸道标本(68.35%)，其次为分泌物(16.95%)，与国内的报道一致[4-5]。科室分布内科以呼吸内科和ICU为主，分别占17.65%和15.98%，这些科室的患者多为老年患者或患病严重、住院时间长、免疫力低下，同时大量使用广谱抗菌药物造成菌群失调，致使铜绿假单胞菌继发感染，药物敏感的铜绿假单胞菌被杀灭，耐药性菌株得以存活并成优势菌群。外科则以普外科、肿瘤科、神经外科为主，分别占12.43%、6.40%和6.19%，因此加强消毒灭菌制度的落实，减少侵入性操作及合理使用抗菌药物是预防铜绿假单胞菌的有效措施。
铜绿假单胞菌具有固有耐药和获得性耐药，经常表现对β-内酰胺类、喹诺酮类、氯霉素类和磺胺类等抗菌药物的多重耐药，耐药率呈逐年上升趋势，且与抗菌药物使用量存在相关性。铜绿假单胞菌是全球共识的多药耐药非发酵菌，共具有复杂的耐药形成机制：①该菌能产生破坏抗菌药物活性的多种灭活酶、钝化酶和修饰酶;②基因发生突变使得抗菌药物的作用靶位变化;③细胞外膜固有的微孔蛋白缺失及膜通透性降低;④细胞主动泵出机制使进入菌细胞的抗菌药物排出菌体;⑤铜绿假单胞菌感染宿主后形成生物膜，可阻挡白细胞、各种抗体、抗菌药物进入菌细胞内吞噬和杀灭细菌。携带不同耐药质粒不同类型的铜绿假单胞在医院内环境中大量繁殖、广泛传播，致使多药耐药铜绿假单胞菌的数量日益增多，耐药率也逐年攀升[6]。本研究结果显示，铜绿假单胞菌对阿莫西林/克拉维酸和氨苄西林/舒巴坦的耐药率>90%，表明这类抗菌药物已经不适于铜绿假单胞菌感染的治疗。近年来以亚胺培南为主的碳青霉烯类抗菌药物被视为控制革兰阴性菌感染的强效药物，在临床经验用药中广泛应用，使铜绿假单胞菌对亚胺培南和美洛培南的耐药率呈上升趋势。本研究结果显示，铜绿假单菌对亚胺培南和美洛培南的耐药率分别从2012年的8.45%、8.09%上升到2013年的13.10%、11.16%。由于抗菌药物的不合理使用会增加铜绿假单胞菌适应性耐药，因而临床上应加强抗菌药物最优剂量的管理，慎重、合理地使用碳青霉烯类抗菌药物，密切关注铜绿假单胞菌耐药性的发展，采用有效的感染控制措施。铜绿假单胞菌对头孢吡肟、哌拉西林/他唑巴坦等抗菌药物较敏感，耐药率为6.22%～9.85%，临床常选择其作为治疗呼吸道感染的经验性用药。铜绿假单胞菌对阿米卡星和妥布霉素敏感，耐药率仅为1.15%～3.02%，尽管这类药物对铜绿假单胞菌抗菌作用良好，但由于其耳、肾毒性等不良反应，限制了其在临床的应用，尤其是老年患者应慎用，一般不单用，常与β-内酰胺类抗生素联合使用。
