下面是小编为大家整理的携带人TGF-β1腺病毒载体的构建及鉴定，本文共5篇，供大家参考借鉴，希望可以帮助您。本文原稿由网友“i花i猫i狗狗”提供。
篇1：携带人TGF-β1腺病毒载体的构建及鉴定
携带人TGF-β1腺病毒载体的构建及鉴定
目的 构建携带人转化生长因子β1(hTGF-β1)的腺病毒载体(Adeno-hTGF-β1),为hTGF-β1基因转染骨髓间质干细胞(BMSCs)的研究奠定基础.方法 应用基因重组技术构建hTGF-β1腺病毒表达载体,分别用限制性内切酶酶切和聚合酶链反应(PCR)鉴定,并通过脂质体Fugene 6介导腺病毒DNA转染293细胞.结果 重组hTGF-β1腺病毒DNA经限制性内切酶XhoⅠ酶切后,得到14.5、8.1、4.2、4.0、2.5、1.4、0.6 kb片段.与空白腺病毒相比,5.6 kb的片段已被置换成4.2 kb和4.0 kb片段;经PI-SceⅠ/I-CeuⅠ双酶切后,得到32.6 kb和2.6 kb含目的基因片段,片段大小无误,表明重组Adeno-hTGF-β1腺病毒表达系统构建成功.以重组Adeno-hTGF-β1DNA为模板的`PCR产物中出现1.35 kb hTGF-β1目的基因片段,表明hTGF-β1基因成功连接至adeno-X腺病毒表达载体中.重组hTGF-β1腺病毒表达载体通过Fugene 6 介导转染293 包装细胞出现细胞病变效应(CPE).采用PCR反应鉴定293细胞包装的腺病毒,证实扩增出247 bp的hTGF-β1目的基因片断和312 bp的腺病毒骨架基因片断.结论 携带人hTGF-β1的腺病毒载体的构建成功,并能在293细胞包装,为hTGF-β1基因转染的BMSCs在软骨组织工程中的应用奠定了基础.
作 者：夏万尧 刘伟 王丹茹 丁文龙 钟梅芳 刘德莉 周广东 崔磊 曹谊林 XIA Wan-yao LIU Wei WANG Dan-ru DING Wen-long ZHONG Mei-fang LIU De-li ZHOU Guang-dong CUI Lei CAO Yi-lin 作者单位：夏万尧,刘伟,王丹茹,刘德莉,周广东,崔磊,曹谊林,XIA Wan-yao,LIU Wei,WANG Dan-ru,LIU De-li,ZHOU Guang-dong,CUI Lei,CAO Yi-lin(上海交通大学医学院第九人民医院整复外科,上海市组织工程重点实验室,上海,11)丁文龙,钟梅芳,DING Wen-long,ZHONG Mei-fang(上海交通大学,基础医学院人体解剖学教研室,上海,200011)
刊 名：上海交通大学学报（医学版） ISTIC PKU英文刊名：JOURNAL OF SHANGHAI JIAOTONG UNIVERSITY(MEDICAL SCIENCE) 年，卷(期)： 26(10) 分类号：Q78 关键词：基因重组 腺病毒 转化生长因子β1篇2：人ICOS胞外区腺病毒载体的构建与鉴定
人ICOS胞外区腺病毒载体的构建与鉴定
目的 利用细菌内同源重组法构建含ICOS胞外区基因的重组腺病毒.方法 用基因工程的方法将ICOS胞外区的cDNA片段插入穿梭质粒pAdTrack-CMV中, 形成转移质粒pAdtrack-cmv-ICOS,将之PmeⅠ酶切线性化后与腺病毒基因组质粒pAdEasy-1共转化大肠杆菌BJ5183,同源重组质粒PacⅠ酶切鉴定后用脂质体转染293细胞,包装成重组体腺病毒颗粒Ad-ICOS.采用PCR方法对重组腺病毒颗粒进行鉴定,利用穿梭质粒pAdTrack-CMV中带有GFP报告基因,对病毒滴度和感染效率进行监测.通过Western Blot检测重组腺病毒感染后的293细胞上清中的ICOS胞外区蛋白.结果 获得了重组人ICOS胞外区腺病毒载体颗粒.PCR检测表明重组腺病毒颗粒含有目的'基因,滴度为 2.1×1010pfu/ml.Western Blot检测到阳性目的条带.结论 细菌内同源重组法是一种高效、简便、快捷的重组体腺病毒载体制备方法.所制备的重组体腺病毒Ad-ICOS在体外能有效表达相应的基因产物,为今后对ICOS胞外区的深入研究奠定了基础.
作 者：范明齐 冯嘉瑜 黄赤兵 王平贤 张艮甫 作者单位：第三军医大学新桥医院泌尿外科,重庆,400037 刊 名：重庆医学 ISTIC PKU英文刊名：CHONGQING MEDICAL 年，卷(期)：2006 35(16) 分类号：Q782 关键词：腺病毒 ICOS胞外区 同源重组篇3：小鼠MK基因siRNA重组腺病毒载体的构建及鉴定
小鼠MK基因siRNA重组腺病毒载体的构建及鉴定
目的:构建小鼠肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体的'死亡受体(Mouse killer,MK)基因干扰RNA(Small interfering RNA,siRNA)重组腺病毒并在小鼠子宫基质细胞中鉴定其干扰作用.方法:人工合成靶向MK的siRNA干扰序列,将其克隆到穿梭载体psES-HUS上,并与腺病毒骨架质粒pAdeasy-1在BJ5183细菌中进行同源重组,得到pAdeasy-SES-HUS-MKsiRNA,在HEK293细胞中包装并扩增腺病毒颗粒.用纯化后的腺病毒混合液感染原代培养的小鼠子宫内膜基质细胞,RT-PCR及Western Blot检测基质细胞中MK的mRNA及蛋白表达水平.结果:Adeasy-SES-HUS-MKsiRNA混合液均效价为6.8 X 10~(11)pfu/ml,感染原代培养的小鼠子宫内膜基质细胞48h后,MK的mRNA及蛋白水平均显著下调.结论:构建的MK干扰表达腺病毒能有效地抑制MK基因的表达,为进一步研究MK在小鼠子宫基质细胞的功能提供了有效的工具.
作 者：杨根岭 张晋平徐倩 谭冬梅 赖国旗 谭毅 作者单位：重庆医科大学实验动物中心,重庆,400016 刊 名：重庆医科大学学报 ISTIC PKU英文刊名：JOURNAL OF CHONGQING MEDICAL UNIVERSITY 年，卷(期)： 35(2) 分类号：Q953.5 关键词：Mouse killer基因 RNA 干扰 重组腺病毒 Mouse killer gene RNA interference Recombinant adenovirus篇4：人三叶因子1大肠杆菌及毕赤酵母表达载体的构建与鉴定
人三叶因子1大肠杆菌及毕赤酵母表达载体的构建与鉴定
目的:构建人三叶因子1(hTFF1)的大肠杆菌及毕赤酵母表达载体.方法:从人胃窦部提取总RNA,经RT-PCR得到hTFF1 cDNA,用PCR方法扩增hTFF1基因,并将其分别克隆到大肠杆菌的`表达载体pET32α及毕赤酵母的表达载体pGAPZαA中,构建原核及真核重组表达质粒pET32α-hTFF1和pGAPZαA-hTFF1.结果:通过双酶切和基因序列分析确定插入pET32α和pGAPZαA中的片段为hTFF1基因片段.结论:重组质粒pET32α-hTFF1和pGAPZαA-hTFF1成功构建,为在比较原核和真核细胞中hTFF1高效表达的情况及下一步的功能研究奠定了基础.
作 者：吴炜 孙勇 吕尚军 张勇 彭曦 WU Wei SUN Yong LV Shang-jun ZHANG Yong PENG Xi 作者单位：第三军医大学西南医院全军烧伤研究所,创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室,重庆,400038 刊 名：现代生物医学进展 ISTIC英文刊名：PROGRESS IN MODERN BIOMEDICINE 年，卷(期)： 7(8) 分类号：Q78 关键词：三叶因子1 基因重组 毕赤酵母 表达载体 质粒构建篇5：小鼠神经生长因子前导肽和人内吗啡肽-2融合基因重组腺病毒载体的构建与鉴定
小鼠神经生长因子前导肽和人内吗啡肽-2融合基因重组腺病毒载体的构建与鉴定
目的:制备并鉴定携带小鼠神经生长因子前导肽(PN)和人内吗啡肽-2(EM-2)融合基因的重组非增殖型腺病毒.方法:PN-EM-2目的'基因经酶切插入pAxCAwt载体,构建PN-EM-2-pAxCAwt重组黏粒,脂质体转染293细胞获取重组腺病毒.PCR鉴定后扩增不含野生型病毒的阳性克隆并纯化,采用TCID50法测定病毒滴度;体外感染NIH3T3细胞观察转基因的表达,酶联免疫反应(EIA)法测定表达产物浓度.结果:融合基因序列正确,PCR可检测到401 bp的融合基因条带并排除野生病毒株,腺病毒Ad-PN-EM-2滴度为2.03×1010pfu/ml.NIH3T3细胞转染病毒后,细胞培养液内可检测到EM-2的表达,明显高于空转染及未转染细胞(P＜0.05),且随时间的延长,表达水平逐渐上升.结论:成功构建能够在非神经内分泌细胞内转基因表达成熟人EM-2的非增殖型腺病毒,为进一步将其应用于慢性疼痛的基因治疗奠定了基础.
作 者：吴飞翔 俞卫锋 黄盛东 徐学武 龚德军 董刚 袁扬 孙玉明 作者单位：吴飞翔,俞卫锋,徐学武,董刚,孙玉明(第二军医大学东方肝胆外科医院麻醉科,上海,200438)黄盛东,龚德军,袁扬(第二军医大学长海医院胸心外科,解放军胸心外科研究所,上海,200433)
刊 名：第二军医大学学报 ISTIC PKU英文刊名：ACADEMIC JOURNAL OF SECOND MILITARY MEDICAL UNIVERSITY 年，卷(期)：2007 28(11) 分类号： 关键词：内吗啡肽-2 神经生长因子 腺病毒科
