抗P185工程抗体表达与纯化研究

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篇1：抗P185工程抗体表达与纯化研究

抗P185工程抗体表达与纯化研究

人类的原癌基因Her-2编码一个185kDa的跨膜受体酪氨酸激酶,也称为p185,是肿瘤相关蛋白,在多种癌细胞,特别在乳腺癌中有高表达.构建了抗p185/HER-2的二价的嵌合抗体(scFv-Fc),并证明其保留了亲本抗体的特异结合活性,进而建立了高表达的'细胞株.对该嵌合抗体进行滚瓶大规模培养,并对培养产物的纯化条件进行了摸索,建立了亲和层析和阳离子交换层析两步法.最终产物的纯度在95%以上,回收率为63%.摸索了嵌合抗体的冻干保存条件,抗体可以保持其稳定性和结合活性一年以上.嵌合抗体纯化工艺和保存条件的确定,为进一步的临床研究奠定了基础.

作 者：乔婧娟 刘海波 朱娟娟 程联胜 刘兢 QIAO Jing-juan LIU Hai-bo ZHU Juan-juan CHENG Lian-sheng LIU Jing  作者单位：中国科学技术大学生命科学学院,合肥,230027 刊 名：中国生物工程杂志  ISTIC PKU英文刊名：CHINA BIOTECHNOLOGY 年，卷(期)： 26(9) 分类号：Q81 关键词：嵌合抗体   亲和纯化   离子交换纯化   稳定性  

篇2：抗转铁蛋白受体单链抗体的表达、纯化及活性测定

抗转铁蛋白受体单链抗体的表达、纯化及活性测定

根据转铁蛋白受体和转铁蛋白特异性结合的.性质,利用亲和纯化的方法从胎盘中提取转铁蛋白受体.以转铁蛋白受体为抗原包被免疫管,从全合成人源噬菌体单链抗体库中筛选其抗体.对筛选到的抗体进行特异性鉴定后,将抗体基因插入表达载体pET22b(+),转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导后获得可溶性表达.HeLa细胞的免疫组化结果显示,表达的抗体可以与转铁蛋白受体结合.表达产物经Ni-NTA金属螯和层析柱纯化、脱咪唑后,从尾静脉注射小鼠.1h后,去除血液及毛细血管的干扰,在脑实质中检测到了抗体的存在,说明该抗体可以通过血脑屏障.

作 者：赵莉霞 颜冰 许龙 蒋世卫 张莹莹 杨志新 周晓巍 黄培堂 ZHAO Li-Xia YAN Bing XU Long JIANG Shi-Wei ZHANG Ying-Ying YANG Zhi-Xin ZHOU Xiao-Wei HUANG Pei-Tang  作者单位：军事医学科学院生物工程研究所,北京,100071 刊 名：生物工程学报  ISTIC PKU英文刊名：CHINESE JOURNAL OF BIOTECHNOLOGY 年，卷(期)：2006 22(3) 分类号：Q78 关键词：转铁蛋白受体   单链抗体   表达   纯化   血脑屏障  

篇3：猪干扰素-γ基因表达产物的纯化与复性研究

猪干扰素-γ基因表达产物的纯化与复性研究

目的:纯化、复性猪干扰素-γ基因(poIFN-γ)表达产物并分析其抗病毒活性.方法:用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(Isopropylthio-β-D-galactoside,IPTG)诱导原核表达载体pQE30/poIFN-γ,超声裂解包涵体,尿素溶解、Ni-NTA纯化和透析复性后,对所得的'蛋白进行抗病毒活性检测.结果:经复性纯化的目的蛋白纯度达95%以上,在PK15细胞上抗滤泡性口炎病毒比活性为6.2×105u/mg.结论:获得PoIFN-γ活性蛋白,为进一步研究应用奠定基础.

作 者：王丽 何涛 刘晓燕 宋杰 梅志强  作者单位：泸州医学院医学分子生物学实验室,四川泸州,646000 刊 名：泸州医学院学报 英文刊名：JOURNAL OF LUZHOU MEDICAL COLLEGE 年，卷(期)： 32(2) 分类号：Q786 关键词：猪INF-γ基因   纯化   复性   抗病毒活性  

篇4：抗CEA单链抗体与链亲和素融合基因的表达

抗CEA单链抗体与链亲和素融合基因的表达

克隆分泌CEA杂交瘤细胞重链可变区(VH)和轻链可变区(VL),以Linker连接VH及VL构建抗CEA单链抗体.同时以Spacer连接单链抗体和链亲和素,构建成功单链抗体和链亲和素融合基因,克隆该融合基因至原核表达载体,pET21a(+),经IPTG诱导表达出该双特异性融合蛋白.活性鉴定表明该融合蛋白具有结合CEA及生物素的双特异性.该融合蛋白在生物领域中有较广阔的应用前景.

作 者：任军 季万胜 周绍娟 陈峥 张学庸 樊代明 REN Jun JI Wan-Sheng ZHOU Shao-Juan CHEN Zheng ZHANG Xue-Yong FAN Dai-Ming  作者单位：任军,REN Jun(第四军医大学西京医院肿瘤中心,西安,710032)

季万胜,周绍娟,陈峥,张学庸,樊代明,JI Wan-Sheng,ZHOU Shao-Juan,CHEN Zheng,ZHANG Xue-Yong,FAN Dai-Ming(第四军医大学西京医院消化内科,西安,710032)

刊 名：生物化学与生物物理进展  ISTIC SCI PKU英文刊名：PROGRESS IN BIOCHEMISTRY AND BIOPHYSICS 年，卷(期)： 27(4) 分类号：Q786 关键词：单链抗体   融合蛋白   基因表达  

篇5：人源抗狂犬病毒二硫键稳定性Fv抗体片段基因的构建与表达

人源抗狂犬病毒二硫键稳定性Fv抗体片段基因的构建与表达

目的构建人源抗狂犬病毒二硫键稳定性Fv(dsFv)抗体基因,并在原核系统中实现高效表达,制备有活性的人源抗狂犬病毒dsFv抗体片段.方法采用PCR定点突变的方法,构建抗狂犬病毒dsFv抗体的重、轻链(VH、VL)突变基因,Nde Ⅰ和Not Ⅰ双酶切后分别插入pET-22b(+)表达质粒中,转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达.将VL、VH包涵体蛋白经盐酸胍变性,按比例混合在复性折叠缓冲液中,使二者折叠形成dsFv抗体片段.并以其母本抗体scFv作对照,对其抗原特异性和稳定性进行初步评价.结果在VH的第44位氨基酸和VL的第100位氨基酸引入了半胱氨酸,成功构建了抗狂犬病毒dsFv抗体基因,并在原核系统中实现了对二者的高效表达,VH、VL蛋白在复性缓冲液中正确折叠形成了dsFv抗体片段.结论对筛选获得的.抗狂犬病毒scFv成功进行了稳定性改构,制备了有活性的dsFv抗体片段,改构以后的dsFv保持了对狂犬病毒的特异结合活性,而其在血清中的稳定性有明显改进,而且其热稳定性和抵抗尿素化学变性的能力亦大大改进.

作 者：赵小玲 荫俊 陈伟强 杨冠 张素娟  作者单位：赵小玲(100071,北京,军事医学科学院微生物流行病研究所;天津军事医学科学院卫生学环境医学研究所)

荫俊(100071,北京,军事医学科学院微生物流行病研究所)

陈伟强(天津军事医学科学院卫生学环境医学研究所)

杨冠(军事医学科学院生物工程研究所)

张素娟(解放军第254医院)

刊 名：解放军医学杂志  ISTIC PKU英文刊名：MEDICAL JOURNAL OF CHINESE PEOPLE'S LIBERATION ARMY 年，卷(期)： 31(2) 分类号：Q78 关键词：狂犬病病毒   二硫键稳定性Fv抗体   基因表达  

篇6：新型水蛭素嵌合抗栓剂的构建表达与功能研究

新型水蛭素嵌合抗栓剂的构建表达与功能研究

水蛭素(hirudin,HV)作为新一代抗凝剂,是目前已知最强的天然凝血酶抑制剂,并有望在临床上完全取代肝素.虽然水蛭素有许多优点,但出血倾向是其在临床应用上的主要副作用,尚没有好的解决办法.针对水蛭素在临床应用中所出现的.这个问题,依据血栓形成的生理生化机制,构建出了含FXa识别序列水蛭素嵌合抗栓剂,来降低水蛭素在非血栓部位的活性从而减小出血的危险.小鼠尾部血栓模型实验表明,此新型嵌合抗栓剂在不减少水蛭素抗凝血活性的同时,又大幅度地降低出血副作用,具有非常重要的临床意义.

作 者：牛晋阳 董春娜 靳继德 石炳兴 吴祖泽 NIU Jin-yang DONG Chun-na JIN Ji-de SHI Bing-xing WU Zu-ze  作者单位：军事医学科学院全军实验血液学重点实验室,北京,100850 刊 名：中国生物工程杂志  ISTIC PKU英文刊名：CHINA BIOTECHNOLOGY 年，卷(期)：2006 26(4) 分类号：Q819 关键词：水蛭素   出血副作用   凝血酶   FXa  

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